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BCA蛋白定量试剂盒在使用中不受样本杂质影响
发布日期：
2019-09-11
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3877
BCA蛋白定量试剂盒是一种灵敏并且抗干扰能力强的蛋白定量检测试剂盒。蛋白质在碱性条件下能够将 Cu2+还原为Cu+，BCA (Bicinchoninic acid)与 Cu+螯合形成紫蓝色螯合物，通过测定螯合产物在562nm 的吸光度值，即可对蛋白浓度进行定量。BCA法与传统方法相比，更简单、更稳定、更灵敏度。BCA法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响。
1、蛋白标准(BSA)粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。
2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
3、如果检测效果不佳，可以室温放置2h或60℃放置30min，颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快；如果浓度较低，可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。
4、测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。
5、BCA法检测中样本中不应含有EGTA，否则影响检测结果。
6、因BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，建议每次测定时都做标准曲线，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非控制显色反应的时间和温度，否则每次都做标准曲线。
7、如果没有酶标仪，也可以使用普通分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大；使用分光光度计测定蛋白浓度时，可以测定的样品数量可能会显著减少。
8、为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当加热，但是切勿过热，否则易失效。
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