　　DNA聚合酶在新DNA链合成中扮演着重要的角色，是PCR反应*的组成部分。因此，充分了解聚合酶的特点以及高级DNA酶今后的发展方向，对于将PCR方法推广到各种生物学实验应用至关重要。自从在早期PCR实验中开始使用TaqDNADNA聚合酶至今，其特异性、热稳定性、保真度和合成能力得到了明显的改进。在选择之前，先了解一下DNA聚合酶的四个重要特点：热稳定性，保真度，扩增速度及特异性。

　　热稳定性

　　热稳定性是指DNA聚合酶能够耐受高温的能力。不同的DNA聚合酶的热稳定性差异较大，一般通过半衰期来体现。由于热循环是DNA扩增重复链式反应条件的关键特征，因此，所使用DNA聚合酶的热稳定性非常重要。尽管初来自于嗜热菌菌株的TaqDNA聚合酶可耐受相对较高的温度，但是其半衰期在90°C以上时明显缩短。当使用长时间高温使具有二级结构和富含GC序列的DNA变性时，这一缺陷便成为一大难题。

　　保真度

　　保真度是指DNA聚合酶复制DNA模板的能力。部分DNA聚合酶具有3’-5’的核酸外切酶活性，能够校正错误碱基。保真度的高低可通过错配率来体现。DNA聚合酶的校正能力决定了保真度，会影响DNA序列复制的准确性。因此，高保真DNA聚合酶就是具有强校正活性的酶。DNA聚合酶准确复制DNA序列（即获得无错误序列）的能力对分子克隆、测序和定点突变等实验应用至关重要。

　　扩增速度

　　扩增速度是指在延伸时，DNA聚合酶向DNA新链中掺入核苷酸的速率。扩增速度除与DNA聚合酶有关，还会受到延伸温度，缓冲液及模板复杂程度等的影响。

　　特异性

　　特异性是指DNA聚合酶在PCR过程中只扩增目的片段的能力。为了提高PCR特异性，常通过抗体法或配体法等方式对DNA聚合酶进行修饰，使酶活性在低温条件下封闭，减少非特异性延伸和扩增。

上一篇：关于双荧光素酶报告系统的那些百问百答下一篇：细胞培养瓶的瓶颈有好几个样式

上海伯易生物科技有限公司

地址：上海市徐汇区宜山路425号光启城22楼