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大型质粒抽提试剂盒的操作方法
发布日期：
2017-11-23
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3661
大型质粒抽提试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司*新型材料。、专一吸附DNA。大型质粒抽提试剂盒使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。
1) 柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液BL，12,000rpm(～13400×g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
2) 将4.5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm(～13400×g)离心1min，尽量吸取上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
3) 向留有菌液的离心管中加入250μl溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器*悬浮细菌沉淀。注意：如果有未*混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4) 向离心管中加入250μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不*，应减少菌体量。
5) 向离心管加入350μl溶液P3（，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀12000rpm(～13400×g)离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6）将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀，12000rpm(～13400×g)离心30-60s。倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
7）可选步骤：向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm(～13400×g)离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。
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